实验步骤（1）取四周龄SD大鼠，颈椎脱臼法处死后立即用75%乙醇浸泡，移入超净工作台内，用大头针固定大鼠四肢于工作台面的泡沫板上；（2）碘酒擦拭四肢，再用酒精棉球擦拭，无菌条件下用灭菌消毒后的镊子和剪刀分离大腿腿骨，尽可能去除筋膜、肌肉和结缔组织；从关节处分离出软骨组织，将其剪成小于1mm3的组织块，用含双抗的PBS溶液冲洗两遍；（3）软骨组织块静置5min，弃去上层液体及悬浮组织，往离心管中加3...

小鼠海马神经元细胞的原代分离培养：用0.01%的 L-多聚赖氨酸溶液包被培养板和小玻片，37℃恒温孵育 4h 或常温过夜。吸弃 L-多聚赖氨酸溶液，灭菌去离子水漂洗培养孔及小玻片，晾干备用。 （1）75%酒精消毒新生24h内的健康C57小鼠，在无菌条件下脱颈处死，剪开头皮及颅骨，取出脑组织，置于盛冷的pH7.2，无钙、镁的D-Hank's液的平皿中（下置冰袋）。（2）无菌分离海马...

实验步骤（1）取SD大鼠，颈椎脱臼法处死后立即用75%乙醇浸泡，移入超净工作台内，用大头针固定大鼠四肢于工作台面的泡沫板上。（2）碘酒擦拭四肢，再用酒精棉球擦拭，无菌条件下用灭菌消毒后的镊子和剪刀分离出大鼠股骨和胫骨，剔除骨头表面肌肉，PBS溶液冲洗两遍。（3）从中间剪断股骨和胫骨，用2ml无菌注射器吸取DMEM/F12溶液冲出骨髓细胞多次，再用针头吹打，吸管吸入离心管内，1000r/min离心5...

方法：1、新生1天内的SD大鼠，断头，剪开头皮及颅骨，取出脑组织，置于盛冷的D-Hank's液的平皿中（下置冰袋）。2、无菌剥离脑组织,分离大脑皮层，仔细剥离脑膜及血管。3、将组织剪切成 1mm3左右的组织块，0.125%胰蛋白酶消化，37℃作用 15-20min，制成细胞悬液。4、悬液收集于新的离心管，弃上清液重悬，过滤。台盼蓝计数。接种到预先用多聚赖氨酸包被的24孔培养板。5、培养 4...

培养板的包被：（1）将盖玻片裁成 12.5px×12.5px 大小，洗涤剂浸洗、烘干。（2）经 5%盐酸浸泡30min，自来水冲洗20min，三蒸水冲洗，浸泡过夜并烘干；移入 95%酒精浸泡保存。用前酒精灯烤干，放入 24 孔细胞培养板。（3）用 0.01%的 L-多聚赖氨酸溶液包被培养皿和小玻片，37℃恒温孵育 4h 或常温过...