转基因/基因敲除动物模型构建服务

目前，生物医药行业对于各种实验动物模型以及相关技术服务的需求日益增长。经过长期的发展和探索，威斯腾“实验动物转基因和基因敲除”服务平台在专家团队的带领下，已经形成非常成熟的服务体系，其中主要的服务项目包括以下方面：

一、转基因小鼠制备

将一段外源DNA显微注射到小鼠受精卵雄原核中，从而使这段外源DNA整合到受精卵的染色体里，再将受精卵移植到假孕代孕母鼠，产生带有外源基因的子代小鼠，从而建立外源基因稳定整合的转基因小鼠。本服务接受委托方提供的基因表达载体（包括普通的质粒载体和BAC），亦可根据委托方要求代为构建。根据委托方的不同需求，转基因小鼠制备周期3~6个月，项目完成后提供不少于3只转基因阳性首建者小鼠，以及相关的实验材料和技术资料。

该项工作主要包括以下几个部分：1.转基因载体构建和制备；2.原核注射；3.转基因小鼠的饲养和鉴定。

 二、基因剔除（敲入）小鼠制备

采用同源重组策略对小鼠基因组特定位点进行遗传修饰，可根据需要实现常规基因剔除或条件性基因剔除。采用同源重组策略对小鼠基因组特定位点进行遗传修饰，可根据需要实现常规基因剔除或条件性基因剔除。对于基因剔除项目，委托方只需提供基因名称或Genebank序列即可，对于基因敲入项目接受委托方构建的打靶载体，亦可根据委托方要求代为构建。项目完成后提供不少于3只阳性杂合子小鼠。

基因剔除（敲入）小鼠制备主要包括以下步骤：1）载体设计和构建；2）胚胎干细胞的电转和培养；3）阳性克隆的筛选和鉴定；4）胚胎干细胞显微注射；5）饲养和传代；6）运输所有课题相关材料（包括一笼不少于3只阳性杂合子小鼠，和所有阳性重组胚胎干细胞）。

三、细胞技术服务

1）提供小鼠胚胎成纤维细胞(Mouse embryonic fibroblasts, MEFs)；

2）小鼠胚胎干细胞的培养、体外分化及相关的细胞学实验；

3）为客户提供特殊品系小鼠胚胎干细胞的分离制备服务，并利用特殊品系胚胎干细胞进行基因打靶。

四、小鼠胚胎操作、品系建立与鼠种保存

1）小鼠胚胎的采集、冻存和冻存胚胎的复苏；

2）小鼠体外受精、胚胎生物净化、小鼠嵌合胚胎的制备；

3）提供小鼠饲养、繁殖、基因型鉴定及品系建立的技术服务

五、基因工程小鼠遗传鉴定与表型分析

1）分离鼠尾基因组DNA；

2）应用PCR或southern blot方法分析小鼠基因型；

3）应用免疫组化或流式细胞仪分析转基因小鼠的基因表达。

【服务流程】

【本平台可构建的动物模型（部分）】

【本平台合作项目】

分子生物学、细胞生物学、病理染色检测、细胞敲除/敲入、模式与转基因动物、SPF动物保种、免疫学检测、影像学检测、原代培养、细胞药筛、CRISPR/Cas9基因编辑、基因芯片、高通量测序、蛋白组学、代谢组学、高通量高内涵筛选、药效学评价、药理毒理学实验、慢病毒包装与稳转株建立、siRNA与纳米载药、ChIP、Co-IP、生物信息学分析、知识产权服务！

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