基因组文库（Genomic Library）构建

用限制性内切酶切割细胞的整个基因组DNA，可以得到大量的基因组DNA片段，然后将这些DNA片段与载体连接，再转化到细菌中去，让宿主菌长成克隆。这样，一个克隆内的每个细胞的载体上都包含有特定的基因组DNA片段，整个克隆群体就包含基因组的全部基因片段总和称为基因组文库。

载体的种类和特征：

	受体细胞	结构	插入片段	举例
质粒	E.coli	环状	很小，<8kb	pUC18/19 ,T-载体, pGEM3z
λ噬菌体	E.coli	线状	9-24kb	EMBL，λgt系列
丝状噬菌体及噬菌粒	E.coli	环状	<10kb	M13系列
粘粒载体	E.coli	环状	35-45kb
BAC	E.coli	环状	约300kb
PAC	E.coli	环状	100-800kb	PCYPAC
YAC	酵母细胞	线性染色体	100-2000kb
MAC	哺乳动物细胞	环状	>1000kb
病毒载体	动物细胞	环状		SV40 载体，昆虫杆状病毒载体
穿梭载体	动物细胞和细菌	环状		pSVK3质粒，PBV,Ti质粒，

基因组文库构建步骤：
1、载体：

l噬菌体：48.5kb,插入型(最多可容纳9kb)、取代型(可容纳 38-51kb，最适19-20kb)， EMBL, Charon 粘性质粒(Cosmid)：4-6kb, 质粒+噬菌体的性质，可容纳大片段的外源基因，最多可容纳46kb。
酵母人工染色体克隆体系（YAC，Yeast Artificial Chromosome Cloning System）插入大小200—1000kb。

2、载体DNA的制备：高分子量的外源DNA 100-150kb

载体DNA酶切反应-----载体臂的纯化-----载体脱磷处理（常用BamHI）（蔗糖密度梯度离心）（碱性磷酸酶）
3、连接和包装：外源片段与两臂之间的比例，包装蛋白
4、感染宿主菌：选择合适的宿主菌，LE392, NM538, NM539, KW251等
5、基因组文库的保存和扩增
6、测滴度，要在106fu以上

7、保存：氯仿4℃，7% DMSO -70℃

您需要提供：

动物的血或细胞、新鲜植物叶片、活体昆虫或纯化好的DNA样品。

我们提供：

1、文库（10%甘油菌）以及菌落效价（CFU/ml）；

2、随机抽样测序结果。

【服务流程】

服务流程.jpg

【威斯腾生物服务项目】

服务项目.png

【本平台合作项目】

分子生物学、细胞生物学、病理染色检测、细胞敲除/敲入、模式与转基因动物、SPF动物保种、免疫学检测、影像学检测、原代培养、细胞药筛、CRISPR/Cas9基因编辑、基因芯片、高通量测序、蛋白组学、代谢组学、高通量高内涵筛选、药效学评价、药理毒理学实验、慢病毒包装与稳转株建立、siRNA与纳米载药、ChIP、Co-IP、生物信息学分析、知识产权服务！

【全国免费热线】400-675-6758

【电话】 023-65227525

【邮箱】 china-western@163.com

【官网网址】www.cqwestern.net；www.cqwestern.com

【地址】重庆市高新区二郎创业大道高科创业园D栋2楼