慢病毒包装

慢病毒（Lentivirus ）载体是以HIV-1 （人类免疫缺陷I 型病毒）为基础发展起来的基因治疗载体。区别一般的逆转录病毒，它对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力，因此它可以有效地感染包括神经元细胞、肝细胞、心肌细胞、肿瘤细胞、内皮细胞、干细胞等在内的几乎所有的哺乳动物细胞，并且感染效率非常高，是传统方法的数倍甚至数十倍。慢病毒可以将外源基因有效地整合到宿主染色体上，从而达到持久性表达，是目前最受欢迎的基因功能研究工具。慢病毒的研究发展很快，也很深入，在美国已经开展了临床研究，效果非常理想，预示着慢病毒有着广阔的应用前景。现在慢病毒系统已经被广泛应用到各种细胞系的基因过表达、RNA干扰、microRNA研究以及活体动物实验中。

一、慢病毒系统组成
1、一个表达载体，含有目的基因、目的基因的启动子以及其它病毒包装所需的必要元件；
2、一套包含三个辅助质粒的包装质粒Mix，分别表达产生病毒所需的结构蛋白和逆转录酶；
3、293FT 细胞株，能够在表达载体和包装质粒mix 共转染后包装出慢病毒。

二、慢病毒系统优势
1、生产出以HIV-1 为基础的慢病毒，它能有效地转导分裂和非分裂的哺乳动物细胞，因此它的应用潜能超过传统的以MLV 为基础的逆转录系统。
2、无论靶细胞是在体内还是体外培养，慢病毒都能有效地将外源基因携带进去。相比传统腺病毒的瞬时转染，慢病毒能够将目的基因整合到宿主基因组，从而能够长期稳定地表达。
3、宿主非常广泛，包括人、猩猩、小鼠、大鼠、兔、狗等所有已经研究过的哺乳动物。
4、表达载体和包装质粒形成反式互补，且包装质粒又分别由三个质粒构成，从而为安全性提供了更加可靠的保障。

三、慢病毒服务项目：

威斯腾生物提供慢病毒载体构建、RNAi(shRNA)、miRNA、过表达和干扰慢病毒包装以及基于慢病毒技术的稳定细胞系构建服务。

四、过表达或者干扰慢病毒包装操作步骤：

1、目的基因获取（注：客户提供基因ID）或者针对目的基因设计合成shRNA；

2、选择符合要求的载体；

3、构建过表达慢病毒载体或者shRNA载体测序验证；
4. 对于测序正确的重组质粒，提取和纯化高质量（不含内毒素）的重组质粒； 
5. 使用高效重组载体和慢病毒包装质粒共转染293T 细胞，进行病毒包装并收集上清液； 
6. 通过超滤和超速离心浓缩和纯化病毒； 
7. 使用病毒液感染293T细胞，测定病毒滴度。

五、结果提供：

六、慢病毒、腺病毒、逆转录病毒载体系统之间的比较

【服务流程】

【威斯腾生物服务项目】

【本平台合作项目】

分子生物学、细胞生物学、病理染色检测、细胞敲除/敲入、模式与转基因动物、SPF动物保种、免疫学检测、影像学检测、原代培养、细胞药筛、CRISPR/Cas9基因编辑、基因芯片、高通量测序、蛋白组学、代谢组学、高通量高内涵筛选、药效学评价、药理毒理学实验、慢病毒包装与稳转株建立、siRNA与纳米载药、ChIP、Co-IP、生物信息学分析、知识产权服务！

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