流式细胞周期检测

细胞周期的定义

生命是从一代向下一代传递的连续过程，因此是一个不断更新、不断从头开始的过程。细胞的生命开始于产生它的母细胞的分裂, 结束于它的子细胞的形成，或是细胞的自身死亡。通常将通过细胞分裂产生的新细胞的生长开始到下一次细胞分裂形成子细胞结束为止所经历的过程称为细胞周期。在这一过程中，细胞的遗传物质复制并均等地分配给两个子细胞。

PI染色的检测方法

PI能够插入双链DNA中。它被活细胞排斥但能穿透正在死亡或已经死亡的细胞的细胞膜。

1．收集细胞（1～5）×10⁶个，500～1000r/min离心5min，弃去培养液。

2．3ml PBS洗一次。

3．离心去PBS，加入冰预冷的70％的乙醇固定，4℃，2h。

4．离心弃去固定液，3ml PBS重悬，再次离心沉淀细胞，小心吸除上清。

5．用1ml PI染液缓慢并充分重悬细胞沉淀，37℃避光温浴30min，4℃或冰浴避光存放，24h内完成检测。

6．流式检测：在激发波长488nm检测红色荧光，同时检测光散射情况。

结果示例及分析：

图片解析：

①G1期(gap1)，指从有丝分裂完成到期DNA复制之前的间隙时间；

②G2期(gap2)，指DNA复制完成到有丝分裂开始之前的一段时间；

③S期(synthesis phase)，指DNA复制的时期。

图中第一个峰为G1期，第二个峰为S期，第三个峰为G2期。

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