流式细胞术检测细胞凋亡

细胞早期凋亡检测方法Annexin V

备用试剂

1、结合缓冲液 (10X )：0.1 M HEPES， pH 7.4；1.4 M NaCl；25 mM CaCl₂ 。稀释到1X 工作液备用；

2、碘化丙碇Propidium Iodide (PI)。用PBS稀释到 50 μg/ml备用，建议与Annexin V-FITC联合使用；

3、7-AAD。推荐与Annexin V-PE或者Annexin V-Biotin 联合使用；

4、1X PBS  室温储存备用。

染色步骤

1、用预冷的PBS洗涤细胞两次，之后用1X的结合缓冲液重悬细胞，调节细胞浓度到1X10⁶Cells/ml；

2、取100μl调节好浓度的细胞悬液到5ml流式管底部；

3、加入Annexin V标记蛋白和相应的核酸染料(标记的Annexin V与核酸染料均需要摸索到合适的使用浓度，商品化试剂盒按照说明书操作)；

4、均匀混合，室温避光反应15分钟；若是用Annexin V-Biotin标记蛋白染色,反应后用1X的结合缓冲液洗涤细胞一次，再加入合适浓度的标记链霉亲和素Streptavidin，再加入合适的核酸染料，室温避光反应15分钟；

5、向流式管中加入400μl 1X的结合缓冲液，重悬后及时上流式细胞仪进行分析。

流式细胞术检测样品推荐制备方法：

细胞周期、细胞凋亡及DNA倍体分析样品（PI染色）的制备：（1）待测样本制成单细胞悬液，然后200g离心5分钟，弃上清。（2）用4℃预冷的70%冷乙醇固定，4℃保存，至少固定18小时。（3）调整细胞浓度为10⁶细胞/毫升，取1毫升细胞悬液，用PBS洗三次，细胞重悬于1毫升PI染液中，37℃孵育30分钟即可进行流式分析。（4）PI染液终浓度为50微克/毫升，RNase A终浓度为20微克/毫升。

结果示例及分析：

左上/P2-Q1：坏死细胞；

右上/P2-Q2：晚期凋亡细胞；

右下/P2-Q3：早期凋亡；

左下/P2-Q4：未发生凋亡的细胞。

细胞凋亡率：P2-Q2与P2-Q3象限百分率的和。

【服务流程】

【威斯腾生物服务项目】

【本平台合作项目】

分子生物学、细胞生物学、病理染色检测、细胞敲除/敲入、模式与转基因动物、SPF动物保种、免疫学检测、影像学检测、原代培养、细胞药筛、CRISPR/Cas9基因编辑、基因芯片、高通量测序、蛋白组学、代谢组学、高通量高内涵筛选、药效学评价、药理毒理学实验、慢病毒包装与稳转株建立、siRNA与纳米载药、ChIP、Co-IP、生物信息学分析、知识产权服务！

【全国免费热线】400-675-6758

【电话】 023-65227525

【邮箱】 china-western@163.com

【官网网址】www.cqwestern.net；www.cqwestern.com

【地址】 重庆市高新区二郎创业大道高科创业园D栋2楼