均一化cDNA文库构建

均一化cDNA文库是克服基因转录水平上巨大差异给文库的筛选和分析带来障碍的有效措施，有利于研究基因的表达和分析。现在，在构建均一化cDNA文库中至少有两种主要的观点。一种是基于复性动力学的原理，高丰度的cDNA在退火下复性速度快，而低丰度的cDNA复性要很长时间，从而可以通过控制复性时间来降低丰度；另一种是基于基因组DNA在拷贝数上具有相对均一化的性质，通过cDNA和DNA的饱和杂交而降低在文库中高拷贝存在的cDNA的丰度。我们主要通过第一种方法实现均一化，以达到降低基因间拷贝数差异，有助于低拷贝基因的筛选。

操作流程：

RNA提取；

mRNA分离；

cDNA合成与均一化处理；

cDNA长度分级；

分级后的cDNA与目的载体的all-direct重组；

重组产物电转化。

均一化cDNA文库的鉴定：

检测库容量（总CFU）；随机挑取32个克隆子，PCR方法检测平均插入片段大小；抽提均一化cDNA文库的混合质粒（大抽），qPCR检测均一化前后两个文库总质粒中两个看家基因的表达量差异，以判断均一化的效果。

送样要求：

针对每个文库，客户需提供200ug以上的RNA或2g以上的组织样本。

结果提供：

我们提供构建好的cDNA文库的甘油菌液（含20%甘油的LB培养基），随机克隆子的PCR鉴定图谱，文库构建报告。

【服务流程】

【威斯腾生物服务项目】

【本平台合作项目】

分子生物学、细胞生物学、病理染色检测、细胞敲除/敲入、模式与转基因动物、SPF动物保种、免疫学检测、影像学检测、原代培养、细胞药筛、CRISPR/Cas9基因编辑、基因芯片、高通量测序、蛋白组学、代谢组学、高通量高内涵筛选、药效学评价、药理毒理学实验、慢病毒包装与稳转株建立、siRNA与纳米载药、ChIP、Co-IP、生物信息学分析、知识产权服务！

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