细胞系基因靶向操作服务

基因敲除敲入技术一直是研究特定基因功能的有效工具。威斯腾生物利用最新的CRISPR/Cas系统可以有效的实现对细胞系特定基因的敲除和定点突变。

技术原理

Clustered Regularly Interspaced Short PalindromicRepeats（CRISPR）/Cas是细菌和古细菌不断进化而获得的免疫防御机制，其中II型CRISPR/Cas免疫系统依赖Cas9内切酶家族靶向和剪切外源DNA。CRISPR/Cas9系统通过小导向RNA(sgRNA)对切割区域进行识别，进而利用Cas9内切酶实现靶向区域的切割以产生DNA双链断裂。该系统灵活简单，可实现多个靶点的同时操作。目前我们采用Double Nicking技术，显著降低脱靶率。

我们利用该技术，定点敲除和修饰各种细胞系中的特定基因。对打靶细胞进行药物筛选，利用CRISPR/Cas系统获得的基因敲除细胞的剔除效率会明显高于常规的利用RNAi和shRNA介导的基因敲落。
 

技术特色

1. 可实现多个靶基因位点及多个基因的同时敲除；

2. 最新Nickase酶/双gRNA技术，显著降低脱靶率；

3. 无种属限制，适用于各种细胞系的靶向敲除；

4. 服务周期短，2个月即可交付阳性细胞。
 

技术流程

靶向目标序列gRNA的设计及载体构建；

目标细胞系共转染；

阳性细胞株的筛选和鉴定。

应用范畴

基因功能分析：在细胞水平研究基因的功能。

定点突变：建立点突变细胞，可用于药物靶点研究。

启动子功能分析：该方法建立的启动子分析系统，可有效地分析内源性启动子的强度，是一种最理想的分析系统。

【服务流程】

【本平台可构建的动物模型（部分）】

【本平台合作项目】

分子生物学、细胞生物学、病理染色检测、细胞敲除/敲入、模式与转基因动物、SPF动物保种、免疫学检测、影像学检测、原代培养、细胞药筛、CRISPR/Cas9基因编辑、基因芯片、高通量测序、蛋白组学、代谢组学、高通量高内涵筛选、药效学评价、药理毒理学实验、慢病毒包装与稳转株建立、siRNA与纳米载药、ChIP、Co-IP、生物信息学分析、知识产权服务！

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