原位末端凋亡法（Tunel）检测

TUNEL 技术, 即脱氧核苷酸末端转移酶( Term inal2deoxynucleo t idyl t ran sferase, TdT )介导的x2dUTP 缺口末端标记(TdT 2m ediatedx2dU TP n ick end labeling, TUN EL ) 技术，是目前原位检测细胞凋亡最敏感、快速、特异的新方法，已广泛用于生物、医学研究领域。

TdT-mediated dUTP-biotin nick end labeling (TUNEL)是一种用来检测细胞凋亡(apoptosis)的分析方法。细胞凋亡有一项重要的特征为细胞内的DNA会碎裂成片段(DNA fragmentation)，TUNEL可以有效的去探测DNA片段的产生，所以可以传达细胞凋亡的讯息。TdT为terminal deoxynucleotidyl transferase,此种酵素可以在没有DNA模板的情形下，连结核甘酸到DNA的3'-OH处。1992年，以色列科学家Gavrieli等人将TdT引为为标定DNA片段的一个酵素，自此衍生出TUNEL此项技术.TUNEL的好处是可以在细胞凋亡发生的早期，即可侦测到DNA片段的产生，并且可以直接使用在组织切片上，观察细胞凋亡发生的位置。所以TUNEL目前为广泛接受与使用的一种细胞凋亡的分析方法。

操作流程

1．   石蜡切片，常规脱蜡至水; 石蜡切片4um贴在涂有切片粘合剂的载玻片上，58℃烤24h，常规脱蜡至水，二甲苯Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ 各10分钟，无水乙醇，95%，85%，75%乙醇，各2分钟，水洗2分钟；

2．   0.3%H₂O₂作用  30min,室温，PBS洗3min×3次；

3．   Proteinase K 20ug/ml  37℃ 20min；

4．   PBS洗3min×3次；

5．   0.1%Triton×100 PBS洗3min×3次；

6．   PBS洗3min×3次；

7．   TUNEL混合液---1ml Tunel缓冲液中加入10ul  b-11-DUTP, 10ul  TDT, 37℃ 1h,室温1h；

8．   PBS洗3min×3次；

9．   Streptavidin-HRP  1:400  37℃  30min；

     10．PBS洗3min×3次；

     11．0.04%DAB+0.03%H₂O₂显色10min，流水洗；

     12．苏木精衬染1min，盐酸乙醇分化，水洗；

     13．常规树脂封片；

结果

阳性结果为棕黄色（核）或棕褐色，背景呈紫蓝色。

【服务流程】

【威斯腾生物服务项目】

【本平台合作项目】

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