骨髓内皮祖细胞原代培养

操作方法：

（1）颈椎脱臼法处死SD大鼠后，立即用75%乙醇浸泡，移入超净工作台内，用大头针固定大鼠四肢于工作台面的泡沫板上。

（2）碘酒擦拭四肢，再用酒精棉球擦拭，无菌条件下分离出大鼠股骨和胫骨，剔除骨头表面肌肉，PBS溶液冲洗两遍。

（3）去除骨骺端，用1mL无菌注射器吸取DMEM溶液冲洗骨髓直至骨髓腔变白，吸入离心管内，1000rpm离心5min，弃上清。用PBS重悬细胞沉淀。

（4）缓慢将细胞悬液加入预先装有5mL淋巴细胞分离液的15mL离心管内，保持细胞悬液在淋巴细胞分离液上层，注意不要搅动液面，保持二者分层界面。

（5）2000rpm离心20min，离心后溶液分5层，吸取中间骨髓基质细胞层（白膜层），PBS洗3次。

（6）用含生长因子和血清（2%FBS）的EBM-2培养基以106/mL细胞浓度接种于6孔板中，置37℃、5%CO2恒温培养箱中培养，48h后取出未贴壁细胞继续培养。

【服务流程】

【威斯腾生物服务项目】

【本平台合作项目】

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