大鼠心肌成纤维细胞原代分离培养

实验方法

（1）将SD乳鼠在75%酒精中浸泡1-5min，然后固定在泡沫板上，先用碘酒消毒胸腹部，再用酒精消毒。取出无菌剪刀和镊子，先用酒精棉球再次消毒，剪开胸，取心尖部位，快速置于含双抗的预冷的PBS溶液润洗3遍。

（2）剔除周围结缔组织，将心脏置于无菌平皿中，将心脏尽量剪碎，平皿内加入适量0.125%的胰酶，在37度培养箱中，采用分次消化，每次消化5分钟，一共消化8~10次。

（3）每次消化后取上清液，并加入等量的含10%的DMEM/F12培养基，轻轻混匀，中和胰酶的消化，防止消化多度。用100目细胞过滤筛子过滤含细胞的混合液，最后将过滤后的细胞悬液1000R/MIN离心5分钟。离心后收集沉淀，用PBS再次重复离心3次。用细胞培养基将细胞沉淀重悬。于细胞培养瓶中培养。

（4）在培养90分钟左右，将未贴壁的细胞悬液吸出。此时已经贴壁的是心肌成纤维细胞，加入DMEM/F12培养基，放入培养瓶继续培养。

（5）24h换液，并每日观察心肌成纤维细胞的生长。

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